色谱法
不同类型的色谱技术
色谱技术是将样品(例如合成的混合物或生物粗提物)分离成其单个组分的最强大的方法之一。色谱分离技术基于两个阶段之间分配的物质:具有大表面的固定相和移动相通过固定相移动。
最常用的色谱法是气体或液相色谱。差异与柱色谱中的流动相的物理状态有关。在气相色谱中,流动相是通过固体固定相传送样品的气体,而在液相色谱中,流动相是溶剂。化合物与固定相的相互作用,称为分离方式的过程,受极性,大小或特异性结合亲和力的差异。分离方法的色谱法决定了液相色谱技术的类型(表1)。
表1.液相色谱的类型
液相色谱类型 | 基于: |
吸附色谱(正常和反相色谱) | 极性 |
亲和层析 | 具体的结合互动 |
尺寸排除色谱法 | 分子尺寸 |
离子交换色谱 | 收费 |
色谱净化工作流程
吸附柱色谱是用于药物,化学品,香料等的典型隔离和纯化工作流程的主要部分。最初,物质由植物,细菌或其他生物学中化学合成或提取。蒸发用于将材料集中以简化下游加工。如果样品是新的并且不熟悉的,则进行最佳色谱分离条件的屏幕,通常通过薄层色谱(TLC)或分析高压液相色谱(HPLC方法。一旦发现合适的条件,色谱过程升高制备色188金宝搏安卓下载谱法。在制备步骤中,通过快速色谱法,制备HPLC或两者的组合以高量纯化目标化合物。如果使用该技术,则施加快速色谱,用于预纯化步骤和制备HPLC实现最终的高纯度。成功分离化合物后,通过蒸发或冷冻干燥进行第二浓度步骤。此时,该化合物准备通过其他技术分析其纯度和功能,包括熔点分析,分析HPLC,酶测定和其他技术。
合成或提取后的完整工作流程如图1所示。1。
图1.一般提取或合成工作流程中的净化工作流程
吸附柱色谱是液相色谱的第一形式,在米哈伊尔Tsvet发现了100多年前,是一种俄罗斯 - 意大利植物学家,用于将这种色谱过程分离在植物中的颜料。从那时起,色谱技术已经非常迅速发展成合成和提取实验室的必要方法。
在吸附色谱中,分离由样品组分与静止和流动相的相互作用控制。具有不同化学性质(极性)的化合物朝向流动相和固定相显示不同的亲和力或粘合强度。亲和力受到两个分子性质,吸附和解吸的影响。吸附是指某一组分粘附到固定阶段的能力。解吸或溶解性描述了混合物的组分溶解在流动相中的溶解度。速度通过固定相迁移的各个样品组分取决于它们的吸附/解吸性,如图2所示。2。
图2:吸附与解吸
Flash色谱法VS Prep HPLC技术
第一次出版使用升高的压力出现在七十年底,具有称为闪光色谱的方法。除此之外,还试图增加分析HPLC系统的尺寸,从而使其可用于制备色谱(制备HPLC)。188金宝搏安卓下载如今,两种技术经常使用,但对于不同的目的:闪光色谱主要用作以体面的分辨率纯化大样本的预纯化步骤,而在制备HPLC中,目标是在条件下实现最高分辨率(纯度)较低的装载能力。
因此,两种色谱技术在用于固定相(不同粒径)的材料中不同,盒的尺寸或柱(内径(ID)和长度)和移动相的流速,如表2所示。
表2.快速色谱和制备HPLC之间的差异
闪光色谱 |
准备HPLC. |
|
---|---|---|
粒度 |
15 - 63μm |
5 - 15μm |
列ID. |
12 - 115毫米 |
10 - 70毫米 |
流速 |
15 - 250毫升/分钟 |
5 - 100毫升/分钟 |
装载能力 |
<300克 |
<10 G. |
最大压力 |
50巴 |
300巴 |